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TUhjnbcbe - 2025/1/6 0:51:00
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HIV是导致艾滋病的元凶,尽管高效抗逆转录病毒治疗(HAART)能有效地抑制病毒复制,延长患者的寿命,但因为HIV潜伏储存库的存在使得艾滋病无法治愈。HIV潜伏储存库隐藏在被感染细胞的基因组中,如果中断抗逆转录病毒治疗,HIV能够恢复快速复制从而导致艾滋病进展。有复制能力的HIV悄悄潜伏在细胞内,逃脱免疫系统监视,从而形成HIV潜伏储存库。如何准确检测HIV潜伏储存库,可为今后艾滋病治愈提供思路。以下是HIV潜伏储存库的检测方法特点的总结。

病毒生长试验

(viraloutgrowthassay,VOA)


  20世纪90年代首次采用VOA检测HIV潜伏储存库,将静息CD4+T细胞稀释到每孔只有一个细胞后,激活细胞内病毒基因表达并诱导HIV-1从潜伏感染细胞中释放,得出有复制能力的潜伏感染细胞数。该方法价格昂贵、需要大量血液培养、需要在生物安全三级实验室进行2-3周的培养,且刺激一次不能激活所有的潜伏病毒,低估HIV潜伏储存库大小。

活化T细胞后检测HIVRNA试验


  在T细胞激活情况下,通过qPCR检测整个HIV-1生命周期不同形式的RNA,以RNA为基础的检测缩短了细胞培养时间。但一轮刺激并不能激活所有T细胞产生HIVRNA,会在一定程度上低估HIV潜伏储存库大小。

PCR测定法检测HIVDNA潜伏储存库


  基于PCR方法检测HIVDNA成为更简便检测潜伏储存库的方法,并为VOA试验提供补充。这种方法简单快速。从qPCR检测HIV-1DNA确定携带HIVDNA数量,到数字PCR检测HIV-1DNA进行HIV绝对定量,还有Alu-PCR检测整合HIV-1DNA数量去评价HIV潜伏储存库大小。


  由于PCR方法检测出的病毒97%存在缺陷[1],缺陷病毒不能产生具有传染性的HIV,且受到细胞毒性T细胞的积极监控[2]。所以这种方法因为缺陷性病毒的扩增而被严重夸大。

治疗中断和反弹时间作为测量潜伏储存库的大小


  中断治疗后病毒反弹时间反映了HIV潜伏储存库的大小,尽管观察治疗中断后病毒反弹时间是确定患者是否治愈的唯一方法,但是该方法作为检测潜伏储存库大小时,存在道德问题,如抗逆转录病毒治疗的中断或重新治疗会产生一定的耐药性。

完整前病毒DNA检测

(intactproviralDNAassay,IPDA)


  PCR检测HIV潜伏储存库时被缺陷病毒严重夸大后,随后实验研究发现90%缺陷病毒的缺陷发生在包装信号(Ψ)和env区,通过数字PCR检测Ψ和env区识别出完整病毒与缺陷病毒。


  参考文献:


  [1]BrunerKMWZ,SimonettiFR,BenderAM,KwonKJ,SenguptaS,FrayEJ,BegSA,AntarAAR,JenikeKM,BertagnolliLN,CapoferriAA,KuferaJT,TimmonsA,NoblesC,GreggJ,WadaN,HoYC,ZhangH,MargolickJB,BlanksonJN,DeeksSG,BushmanFD,SilicianoJD,LairdGM,SilicianoRF.AquantitativeapproachformeasuringthereservoiroflatentHIV-1proviruses[J].Nature,,():-.


  [2]PollackRAJR,PerteaM,BrunerKM,MartinAR,ThomasAS,CapoferriAA,BegSA,HuangSH,KarandishS,HaoH,Halper-StrombergE,YongPC,KovacsC,BenkoE,SilicianoRF,HoYC.DefectiveHIV-1ProvirusesAreExpressedandCanBeRecognizedbyCytotoxicTLymphocytes,whichShapetheProviralLandscape[J].CellHostMicrobe,,21(4):-.

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